www.wikidata.uk-ua.nina.az

HEK 293 клітинна лінія також відома як Human embryonic kidney cells 293 HEK 293 293 або менш точно HEK клітини Ця клітин

HEK-293

HEK-293 — клітинна лінія, також відома як Human embryonic kidney cells 293, HEK 293, HEK-293, 293, або, менш точно, HEK-клітини. Ця клітинна лінія була штучно отримана з нирки ембріону людини. HEK-293 широко використовують як модельну систему в клітинній біології. Основними причинами популярності цієї клітинної лінії є стабільна проліферація, а також легкість трансфектування. Цю клітинну лінію також використовують в біотехнології для виробництва терапевтичних протеїнів, а також вірусів для генотерапії.

Клітини HEK-293 після кількох днів культивування (росту) у стандартному середовищі.

Походження Редагувати

Клітинна лінія HEK-293 була створена в 1973 році шляхом трансформації культури людських ниркових ембріональних клітин фрагментами ДНК аденовіруса 5 в лабораторії Алекс ван дер Еба (англ. Alex van der Eb) в Лейдені, Нідерланди. Вихідна культура ембріональних ниркових клітин була отримана з єдиного, ймовірно здорового, плоду, легально абортованого відповідно до законодавства Нідерландів. Особа матері і причина аборту невідомі. Вихідна клітинна культура була створена особисто ван дер Ебом, тоді як трансформація аденовірусом була проведена Френком Грехемом (англ. Frank Graham), який на той момент був постдокторантом в тій самій лабораторії. Результати роботи були опубліковані в 1977 році, після того як Грехем залишив Лейден заради нової роботи в Університеті Макмастера в Канаді. Назва HEK походить від «англ. human embryonic kidney», тобто «людські ембріотичні ниркові». Число 293 походить від номера експерименту, занотованого в лабораторному журналі Грехема. Слід зазначити, що Грехем загалом здійснив вісім спроб трансформації, при цьому вдалося отримати лише один клон клітин, який культивували з певними труднощами протягом декількох місяців. Після періоду адаптації до умов культивування in vitro утворилася відносно стабільна лінія HEK-293.

Пізніше було встановлено, що під час трансформації відбулась вставка ~4,3 кБ лівого плеча вірусного геному в 19 хромосому людського геному.

Протягом багатьох років вважалось що клітини HEK-293 були отримані або з фібробластів, або з ендотеліальних, або з епітеліальних клітин; всі ці клітини широко поширені в нирках. Втім, оскільки процес штучної трансформації був вкрай низькоефективним, є підстави вважати, що клітини, які пізніше утворили лінію HEK-293, були певною мірою незвичними. Грехем та інші автори навели факти, які свідчать, що HEK-293 та інші лінії, що утворювались під час трансформації ембріональних ниркових клітин аденовірусом, мають багато ознак незрілих нейронів. Значно пізніше було проведене інтенсивне дослідження геномів і транскриптомів клітин HEK-293, а також 5 клітинних ліній які були виведені з HEK-293. Транскриптоми HEK-293 були порівняні з транскриптомами клітин людських нирок, надниркових залоз, гіпофізу, а також нейронів центральної нервової системи. Відповідно до цих даних, транскриптом клітин HEK-293 найбільш схожий на транскриптом клітин надниркових залоз, які в свою чергу володіють деякими властивостями нейронів. Ймовірним є сценарій коли клітини з надниркових залоз потрапили в вихідну культуру ниркових клітин і потім були трансформовані аденовірусом; тобто саме ембріотичні клітини-прекурсори надниркових залоз поклали початок лінії HEK-293. Відомо що аденовірус більш ефективно трансформує нейрональні клітини порівняно з епітеліальними нирковими клітинами.

Клітини HEK-293 мають дуже складний атиповий каріотип, тобто мають дві або більше копії кожної хромосоми, з модальними числом хромосом 64. Цей каріотип описаний як гіпотриплоїдний, тобто такий що містить більше ніж двократну (диплоїд) але меншу ніж трикратну (триплоїд) кількість хромосом. Серед хромосомних аномалій слід відзначити три копії X-хромосоми і чотири копії хромосом 17 і 22.

Застосування Редагувати

Мікроскопічне зображення імунофлуоресцентно фарбованих клітин HEK-293

Клітини HEK-293 легко вирощувати у культурі і трансфектувати. Їх часто використовують як організм-хост для експресії генів. Надзвичайно висока трансфектабельність (англ. transfectability) дозволяє використовувати різні способи трансфекції. Зокрема, трансфекція ДНК за допомогою фосфату кальцію дає майже 100 % ефективність.

Далі наведено деякі приклади таких експериментів з наукової літератури:

Іншою сферою застосування клітин HEK-293 є створення і розмноження аденовірусних векторів. Такі вектори є ефективними інструментами в молекулярній біології. Однак, оскільки аденовірус є також патогеном людини, він складає загрозу для науковців які з ним працюють. Щоб зменшити ризик, в молекулярній біології використовують модифікований аденовірус якому бракує ключових генів які необхідні для зараження людських клітин. Такий вірус може розмножуватись тільки в спеціальних лабораторних умовах, а саме в клітинній культурі яка сама експресує необхідні вірусу білки. Оскільки клітини HEK-293 були отримані внаслідок трансформації повноцінним аденовірусом, вони експресують необхідні білки. Саме тому вони є зручними для розмноження аденовірусних векторів із видаленими генами (такими як гени E1 та E3).

Посилання Редагувати

  1. Alex van der Eb. . Lines 14–22: USFDA. с. 81. Архів оригіналу за 25 січня 2018. Процитовано 11 серпня 2012. 
  2. Characteristics of a human cell line transformed by DNA from human adenovirus type 5. J. Gen. Virol. 36 (1). July 1977. с. 59–74. PMID 886304. doi:10.1099/0022-1317-36-1-59. [недоступне посилання з лютого 2019]
  3. Cloning and sequencing of the cellular-viral junctions from the human adenovirus type 5 transformed 293 cell line. Virology 233 (2). July 1997. с. 423–9. PMID 9217065. doi:10.1006/viro.1997.8597. 
  4. ↑ Preferential transformation of human neuronal cells by human adenoviruses and the origin of HEK 293 cells. FASEB J. 16 (8). June 2002. с. 869–71. PMID 11967234. doi:10.1096/fj.01-0995fje. 
  5. ↑ Genome dynamics of the human embryonic kidney 293 lineage in response to cell biology manipulations. Nature Commun. 5 (8). September 2014. с. 4767. PMID 25182477. doi:10.1038/ncomms5767. 
  6. . hpacultures.org.uk. ECACC. Архів оригіналу за 2 травня 2012. Процитовано 18 березня 2012. 
  7. Molecular basis of ranolazine block of LQT-3 mutant sodium channels: evidence for site of action. Br. J. Pharmacol. 148 (1). May 2006. с. 16–24. PMC 1617037. PMID 16520744. doi:10.1038/sj.bjp.0706709. 
  8. Control of small inhibitory RNA levels and RNA interference by doxycycline induced activation of a minimal RNA polymerase III promoter. Nucleic Acids Res. 34 (5). 2006. с. e37. PMC 1390691. PMID 16522642. doi:10.1093/nar/gkl034. 
  9. Glycogen synthase kinase 3beta phosphorylates Alzheimer's disease-specific Ser396 of microtubule-associated protein tau by a sequential mechanism. Biochemistry 45 (10). March 2006. с. 3125–33. PMID 16519507. doi:10.1021/bi051634r. 
  10. A simplified system for generating recombinant adenoviruses. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95 (5). March 1998. с. 2509–14. PMC 19394. PMID 9482916. doi:10.1073/pnas.95.5.2509. 
Вікіпедія, Українська, Україна, книга, книги, бібліотека, стаття, читати, завантажити, безкоштовно, безкоштовно завантажити, mp3, відео, mp4, 3gp, jpg, jpeg, gif, png, малюнок, музика, пісня, фільм, книга, гра, ігри
Дата публікації:
HEK 293 klitinna liniya takozh vidoma yak Human embryonic kidney cells 293 HEK 293 HEK 293 293 abo mensh tochno HEK klitini Cya klitinna liniya bula shtuchno otrimana z nirki embrionu lyudini HEK 293 shiroko vikoristovuyut yak modelnu sistemu v klitinnij biologiyi Osnovnimi prichinami populyarnosti ciyeyi klitinnoyi liniyi ye stabilna proliferaciya a takozh legkist transfektuvannya Cyu klitinnu liniyu takozh vikoristovuyut v biotehnologiyi dlya virobnictva terapevtichnih proteyiniv a takozh virusiv dlya genoterapiyi Klitini HEK 293 pislya kilkoh dniv kultivuvannya rostu u standartnomu seredovishi Pohodzhennya RedaguvatiKlitinna liniya HEK 293 bula stvorena v 1973 roci shlyahom transformaciyi kulturi lyudskih nirkovih embrionalnih klitin fragmentami DNK adenovirusa 5 v laboratoriyi Aleks van der Eba angl Alex van der Eb v Lejdeni Niderlandi Vihidna kultura embrionalnih nirkovih klitin bula otrimana z yedinogo jmovirno zdorovogo plodu legalno abortovanogo vidpovidno do zakonodavstva Niderlandiv Osoba materi i prichina abortu nevidomi 1 Vihidna klitinna kultura bula stvorena osobisto van der Ebom todi yak transformaciya adenovirusom bula provedena Frenkom Grehemom angl Frank Graham yakij na toj moment buv postdoktorantom v tij samij laboratoriyi Rezultati roboti buli opublikovani v 1977 roci pislya togo yak Grehem zalishiv Lejden zaradi novoyi roboti v Universiteti Makmastera v Kanadi 2 Nazva HEK pohodit vid angl human embryonic kidney tobto lyudski embriotichni nirkovi Chislo 293 pohodit vid nomera eksperimentu zanotovanogo v laboratornomu zhurnali Grehema Slid zaznachiti sho Grehem zagalom zdijsniv visim sprob transformaciyi pri comu vdalosya otrimati lishe odin klon klitin yakij kultivuvali z pevnimi trudnoshami protyagom dekilkoh misyaciv Pislya periodu adaptaciyi do umov kultivuvannya in vitro utvorilasya vidnosno stabilna liniya HEK 293 Piznishe bulo vstanovleno sho pid chas transformaciyi vidbulas vstavka 4 3 kB livogo plecha virusnogo genomu v 19 hromosomu lyudskogo genomu 3 Protyagom bagatoh rokiv vvazhalos sho klitini HEK 293 buli otrimani abo z fibroblastiv abo z endotelialnih abo z epitelialnih klitin vsi ci klitini shiroko poshireni v nirkah Vtim oskilki proces shtuchnoyi transformaciyi buv vkraj nizkoefektivnim ye pidstavi vvazhati sho klitini yaki piznishe utvorili liniyu HEK 293 buli pevnoyu miroyu nezvichnimi Grehem ta inshi avtori naveli fakti yaki svidchat sho HEK 293 ta inshi liniyi sho utvoryuvalis pid chas transformaciyi embrionalnih nirkovih klitin adenovirusom mayut bagato oznak nezrilih nejroniv 4 Znachno piznishe bulo provedene intensivne doslidzhennya genomiv i transkriptomiv klitin HEK 293 a takozh 5 klitinnih linij yaki buli vivedeni z HEK 293 5 Transkriptomi HEK 293 buli porivnyani z transkriptomami klitin lyudskih nirok nadnirkovih zaloz gipofizu a takozh nejroniv centralnoyi nervovoyi sistemi Vidpovidno do cih danih transkriptom klitin HEK 293 najbilsh shozhij na transkriptom klitin nadnirkovih zaloz yaki v svoyu chergu volodiyut deyakimi vlastivostyami nejroniv Jmovirnim ye scenarij koli klitini z nadnirkovih zaloz potrapili v vihidnu kulturu nirkovih klitin i potim buli transformovani adenovirusom tobto same embriotichni klitini prekursori nadnirkovih zaloz poklali pochatok liniyi HEK 293 Vidomo sho adenovirus bilsh efektivno transformuye nejronalni klitini porivnyano z epitelialnimi nirkovimi klitinami 4 Klitini HEK 293 mayut duzhe skladnij atipovij kariotip tobto mayut dvi abo bilshe kopiyi kozhnoyi hromosomi z modalnimi chislom hromosom 64 Cej kariotip opisanij yak gipotriployidnij tobto takij sho mistit bilshe nizh dvokratnu diployid ale menshu nizh trikratnu triployid kilkist hromosom Sered hromosomnih anomalij slid vidznachiti tri kopiyi X hromosomi i chotiri kopiyi hromosom 17 i 22 5 6 Zastosuvannya Redaguvati nbsp Mikroskopichne zobrazhennya imunofluorescentno farbovanih klitin HEK 293Klitini HEK 293 legko viroshuvati u kulturi i transfektuvati Yih chasto vikoristovuyut yak organizm host dlya ekspresiyi geniv Nadzvichajno visoka transfektabelnist angl transfectability dozvolyaye vikoristovuvati rizni sposobi transfekciyi Zokrema transfekciya DNK za dopomogoyu fosfatu kalciyu daye majzhe 100 efektivnist Dali navedeno deyaki prikladi takih eksperimentiv z naukovoyi literaturi Vivchennya efektu molekul likiv na natriyevi kanali 7 Testuvannya kontrolovanoyi sistemi dlya RNK interferenciyi 8 Vivchennya bilok bilkovih vzayemodij 9 Inshoyu sferoyu zastosuvannya klitin HEK 293 ye stvorennya i rozmnozhennya adenovirusnih vektoriv Taki vektori ye efektivnimi instrumentami v molekulyarnij biologiyi Odnak oskilki adenovirus ye takozh patogenom lyudini vin skladaye zagrozu dlya naukovciv yaki z nim pracyuyut Shob zmenshiti rizik v molekulyarnij biologiyi vikoristovuyut modifikovanij adenovirus yakomu brakuye klyuchovih geniv yaki neobhidni dlya zarazhennya lyudskih klitin Takij virus mozhe rozmnozhuvatis tilki v specialnih laboratornih umovah a same v klitinnij kulturi yaka sama ekspresuye neobhidni virusu bilki Oskilki klitini HEK 293 buli otrimani vnaslidok transformaciyi povnocinnim adenovirusom voni ekspresuyut neobhidni bilki Same tomu voni ye zruchnimi dlya rozmnozhennya adenovirusnih vektoriv iz vidalenimi genami takimi yak geni E1 ta E3 10 Posilannya Redaguvati Alex van der Eb USA FDA CTR For Biologics Evaluation and Research Vaccines and Related Biological Products Advisory Committee Meeting Lines 14 22 USFDA s 81 Arhiv originalu za 25 sichnya 2018 Procitovano 11 serpnya 2012 Characteristics of a human cell line transformed by DNA from human adenovirus type 5 J Gen Virol 36 1 July 1977 s 59 74 PMID 886304 doi 10 1099 0022 1317 36 1 59 nedostupne posilannya z lyutogo 2019 Cloning and sequencing of the cellular viral junctions from the human adenovirus type 5 transformed 293 cell line Virology 233 2 July 1997 s 423 9 PMID 9217065 doi 10 1006 viro 1997 8597 a b Preferential transformation of human neuronal cells by human adenoviruses and the origin of HEK 293 cells FASEB J 16 8 June 2002 s 869 71 PMID 11967234 doi 10 1096 fj 01 0995fje a b Genome dynamics of the human embryonic kidney 293 lineage in response to cell biology manipulations Nature Commun 5 8 September 2014 s 4767 PMID 25182477 doi 10 1038 ncomms5767 ECACC Catalogue Entry for HEK 293 hpacultures org uk ECACC Arhiv originalu za 2 travnya 2012 Procitovano 18 bereznya 2012 Molecular basis of ranolazine block of LQT 3 mutant sodium channels evidence for site of action Br J Pharmacol 148 1 May 2006 s 16 24 PMC 1617037 PMID 16520744 doi 10 1038 sj bjp 0706709 Control of small inhibitory RNA levels and RNA interference by doxycycline induced activation of a minimal RNA polymerase III promoter Nucleic Acids Res 34 5 2006 s e37 PMC 1390691 PMID 16522642 doi 10 1093 nar gkl034 Glycogen synthase kinase 3beta phosphorylates Alzheimer s disease specific Ser396 of microtubule associated protein tau by a sequential mechanism Biochemistry 45 10 March 2006 s 3125 33 PMID 16519507 doi 10 1021 bi051634r A simplified system for generating recombinant adenoviruses Proc Natl Acad Sci U S A 95 5 March 1998 s 2509 14 PMC 19394 PMID 9482916 doi 10 1073 pnas 95 5 2509 Otrimano z https uk wikipedia org w index php title HEK 293 amp oldid 38963309