Редагування генома

Редагування генома — це набір передових біотехнологічних методів, що використовуються в прикладній геноміці, які дозволяють вченим маніпулювати генетичним матеріалом організму. Ці методи включають додавання, видалення або модифікацію послідовностей ДНК у геномі для досягнення конкретних результатів, таких як корекція генетичних порушень, підвищення врожайності або розробка нових методів лікування захворювань. Редагування генів має потенціал для революції в медицині, сільському господарстві та природокористуванні.

Різні покоління нуклеаз, що використовуються для редагування геному, і шляхи відновлення ДНК, які використовуються для модифікації цільової ДНК.

Історія

Концепція редагування генів бере свій початок у 1970-х роках, коли були створені перші рекомбінантні молекули ДНК. Сфера еволюціонувала завдяки розробці різноманітних методів, включаючи ферменти рестрикції, ПЛР та націлювання на гени. Відкриття РНК-інтерференції (RNAi) і нуклеаз цинкового пальця (ZFN) ще більше розширило можливості редагування генів. Розробка ефекторних нуклеаз, подібних до активаторів транскрипції (TALEN), і системи CRISPR-Cas9 у 2010-х роках ознаменувала поворотний момент у цій галузі, запропонувавши точні та ефективні методи редагування послідовностей ДНК.

Дженніфер Даудна та Емманюель Шарпантьє отримали Нобелівську премію з хімії у 2020 році та цілу низку престижних наукових нагород та відзнак за розвиток методу редагування генома CRISPR-Cas9 на початку 2010-х. В анотації до статті 2023 року соавторства Дженніфер Даудни «Технологія CRISPR: десятиліття редагування геному – це лише початок», опублікованій в журналі Science, зазначається:

Галузі молекулярної біології, генетики та геноміки перебувають на критичному етапі — моменті в історії, коли конвергенція знань і методів зробила технічно можливим і неймовірно корисним редагування конкретних пар основ або сегментів ДНК у клітинах і живих організмах. Поява кластерного редагування генома з короткими паліндромними повторами (CRISPR) у поєднанні з прогресом у обчислювальній техніці та можливостях обробки зображень започаткувала нову еру, в якій ми можемо не лише діагностувати захворювання людини та навіть передбачити індивідуальну сприйнятливість на основі особистої генетики, але й діяти на цю інформацію. Так само ми можемо як ідентифікувати, так і швидко змінювати гени, відповідальні за властивості рослин, змінюючи темп сільськогосподарських досліджень і селекції рослин. Застосування цієї конвергенції технологій є глибокими та далекосяжними — і вони відбуваються зараз. За десятиліття після публікації CRISPR-Cas9 як технології редагування геному інструментарій CRISPR та його додатки кардинально змінили біологічні дослідження, вплинувши не лише на пацієнтів із генетичними захворюваннями, а й на сільськогосподарську практику та продукти.

Техніки редагування геному

Редагування генів передбачає цілеспрямовану модифікацію генетичного матеріалу організму для досягнення бажаних результатів. Ці результати можуть варіюватися від лікування генетичних захворювань до підвищення стійкості сільськогосподарських культур. Технології редагування генів стрімко прогресували в останні роки з відкриттям CRISPR-Cas9, революційного інструменту, який значно спростив і прискорив процес редагування геному.

На відміну від ранніх методів генної інженерії, які випадковим чином вставляють генетичний матеріал у геном хазяїна, редагування геному націлює вставки на певні місця. Основним механізмом, задіяним у генетичних маніпуляціях за допомогою програмованих нуклеаз, є розпізнавання цільових геномних локусів та зв'язування ефекторного ДНК-зв'язуючого домену (DBD), дволанцюгових розривів (DSB) у цільовій ДНК ендонуклеазами рестрикції (FokI та Cas) та відновлення DSB за допомогою рекомбінації, спрямованої на гомологію (HDR) або негомологічного з'єднання кінців (NHEJ).

CRISPR-Cas9

CRISPR-Cas9 — це універсальна та ефективна техніка редагування генів, отримана від бактеріальної імунної системи. CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) — це послідовності бактеріальної ДНК, які є частиною адаптивної імунної системи, тоді як Cas9 — це фермент, який розщеплює ДНК. Разом їх можна запрограмувати на націлювання на певні послідовності ДНК і введення модифікацій. CRISPR-Cas9 став найпоширенішим методом редагування генів завдяки простоті використання, економічній ефективності та високій точності.

TALEN

Ефекторні нуклеази, подібні до активаторів транскрипції (TALEN – Transcription activator-like effector nucleases), — це сконструйовані білки, які можуть бути розроблені для зв’язування та розщеплення певних послідовностей ДНК. Вони складаються з ДНК-зв'язуючого домену та нуклеазного домену. TALEN легко налаштовуються та пропонують точний метод для редагування генів, але є більш складними та трудомісткими для проектування та створення порівняно з CRISPR-Cas9.

Нуклеази цинкового пальця (ZFN)

Нуклеази цинкового пальця (ZFN) — це сконструйовані білки, які містять ДНК-зв’язуючий домен і нуклеазний домен. Подібно до TALEN, ZFN можуть бути розроблені для націлювання на певні послідовності ДНК для редагування. Однак вони мають нижчу ефективність і специфічність порівняно з TALEN і CRISPR-Cas9.

Редагування основ

Редагування основ (Base editing) — це метод, який безпосередньо перетворює одну пару основ в іншу без необхідності дволанцюгових розривів ДНК. Він використовує модифіковані системи CRISPR-Cas9 або CRISPR-Cas12a, злиті з ферментом, що редагує основи, таким як цитидиндезаміназа або аденіндезаміназа. Базове редагування пропонує точний і ефективний підхід для внесення конкретних змін одного нуклеотиду без збільшення вставок або видалень.

Первинне редагування (Prime editing)

Prime editing — це новіша техніка редагування генів, яка поєднує аспекти CRISPR-Cas9 і редагування основ. У ньому використовується модифікований фермент Cas9, злитий із ферментом зворотної транскриптази, а також спеціально розроблена молекула РНК, яка називається основною направляючою РНК для редагування (pegRNA). Основне редагування дозволяє вносити більш різноманітні та точні модифікації, включаючи вставки, видалення та перетворення основ, без утворення дволанцюгових розривів ДНК.

Програмоване додавання за допомогою елементів націлювання на сайт (PASTE)

PASTE (точні редактори основ аденіну та цитозину) — це відносно новий метод редагування генів, який розширює сферу редагування основ. PASTE забезпечує точне перетворення як аденіну (A) на гуанін (G), так і цитозину (C) на тимін (T) у послідовностях ДНК. Ця техніка використовує унікальну комбінацію CRISPR-Cas9, редакторів основи цитозину (CBE) і редакторів основи аденіну (ABE) для досягнення цих перетворень. PASTE пропонує потужний інструмент для внесення специфічних і цілеспрямованих модифікацій у послідовності ДНК з високою ефективністю, розширюючи можливості застосування редагування основи в дослідженнях і терапії.

Застосування

Медицина

Редагування генів має великі перспективи в медицині для лікування та профілактики генетичних розладів і захворювань. Його використовували для корекції генетичних мутацій у тваринних моделях захворювань людини, та в клітинах людини, включаючи серпоподібноклітинну анемію, муковісцидоз і м’язову дистрофію. Крім того, вивчається можливість редагування генів для розробки нових методів лікування мітохондріальних патологій, онкопатологій та інших хвороб людини.

Використання для геному людини

У листопаді 2017 року в Каліфорнії здійснено першу у світі процедуру щодо «редагування» генома дорослої людини. Пацієнтом став дорослий чоловік з мукополісахаридозом ІІ типу (синдромом Хантера).

У листопаді 2018 китайські вчені повідомили про двійню (Лулу і Нана), яким вперше у світі серед дітей було відредаговано геном. Їхній геном було відредаговано для стійкості від вірусу ВІЛ.

Сільське господарство

Редагування генів має потенціал для революції в сільському господарстві шляхом підвищення врожайності, вмісту поживних речовин і стійкості до шкідників і хвороб. Його використовували для вирощування культур із покращеними властивостями, таких як стійка до гербіцидів соя, посухостійка кукурудза та яблука, які не буріють. Також було створено генно-відредаговану худобу та рибу з бажаними рисами, такими як збільшення м’язової маси або стійкість до хвороб.

Біотехнологія та промисловість

Редагування генів відіграє вирішальну роль у біотехнологічній та фармацевтичній промисловості. Його використовують для виробництва генетично модифікованих організмів для досліджень, виробництва ліків і розробки біопалива. Крім того, редагування генів використовувалося для посилення виробництва ферментів, білків та інших цінних біомолекул.

Генотерапія та редагування геному: відмінності

І редагування геному, і генотерапія пов'язані з модифікацією генетичного матеріалу для лікування захворювань, але вони відрізняються підходом і цілями.

Редагування геному стосується цільової модифікації послідовностей ДНК у геномі клітини чи організму за допомогою молекулярних інструментів, таких як CRISPR-Cas9. Ця технологія дозволяє вносити точні та специфічні зміни в послідовність ДНК, наприклад додавати або видаляти певні гени або виправляти мутації, які викликають захворювання.

З іншого боку, генна терапія передбачає введення нового генетичного матеріалу в клітини пацієнта для лікування або лікування хвороби. Це можна зробити шляхом введення здорової копії дефектного гена, заміни відсутнього або нефункціонуючого гена або введення нового гена, який може забезпечити терапевтичну користь.

У деяких випадках редагування геному можна використовувати як інструмент генної терапії. Наприклад, редагування геному можна використовувати для модифікації ДНК власних клітин пацієнта для введення терапевтичних генів або для виправлення мутацій у генах пацієнта перед їх введенням як частину лікування генною терапією.

Загалом і редагування геному, і генна терапія мають великі перспективи для лікування генетичних захворювань, і поточні дослідження продовжують удосконалювати ці методи та розробляти для них нові застосування.

Див. також

• Генотерапія
• Синтетична геноміка
• Генетична інженерія
• Ендонуклеази рестрикції
• Дженніфер Даудна
• Молекулярна медицина

Додаткова література

Книги

• Geraldo A. Passos (2023). Genome Editing in Biomedical Sciences. Springer Cham. ISBN 978-3-031-33324-8.
• Synthego (2023). CRISPR Revolution in Cell & Gene: Therapy Key Challenges and Potential Solutions in Clinical Development..
• Slokenberga Santa; Minssen Timo; Nordberg Ana (2023). Governing, Protecting, and Regulating the Future of Genome Editing: The Significance of ELSPI Perspectives. Brill | Nijhoff. ISBN 978-90-04-52613-6.
• Food and Agriculture Organization of the United Nations (2022). Gene editing and agrifood systems. ООН.
• Luo, Yonglun (2019). CRISPR gene editing: methods and protocols. New York, NY. ISBN 978-1-4939-9170-9.
• Sternberg, Samuel H. (2017). A crack in creation: gene editing and the unthinkable power to control evolution. Boston. ISBN 978-0-544-71694-0.
• Gupta, Om Prakash; Karkute, Suhas Gorakh (2022). Genome editing in plants: principles and applications (1st edition). Boca Raton. ISBN 978-1-000-41019-8.
• National Academies of Sciences, Engineering, and Medicine (2017). Human genome editing: science, ethics, and governance. Washington, DC. ISBN 978-0-309-45288-5.

Журнали

• CRISPR Journal
• Gene and Genome Editing
• Frontiers in Genome Editing

Статті

• Wang Joy Y.; Doudna Jennifer A. (20 січня 2023). CRISPR technology: A decade of genome editing is only the beginning. Science (англ.) 379 (6629). doi:10.1126/science.add8643.
• The Essential Guide To Genome Engineering: Techniques & Applications (2022)
• CRISPR in Agriculture: An Era of Food Evolution
• Gaj Thomas; Gersbach Charles A.; Barbas Carlos F. (2013). ZFN, TALEN, and CRISPR/Cas-based methods for genome engineering. Trends in Biotechnology 31 (7). doi:10.1016/j.tibtech.2013.04.004.

Примітки

1. Saurabh S (March 2021). Genome Editing: Revolutionizing the Crop Improvement. Plant Molecular Biology Reporte 39 (4): 752–772. doi:10.1007/s11105-021-01286-7. 
2. Bak, Rasmus O.; Gomez-Ospina, Natalia; Porteus, Matthew H. (August 2018). Gene Editing on Center Stage. Trends in Genetics 34 (8): 600–611. ISSN 0168-9525. PMID 29908711. doi:10.1016/j.tig.2018.05.004. 
3. Food and Agriculture Organization of the United Nations (2022). Gene editing and agrifood systems. ООН. 
4. 1972: First Recombinant DNA. Genome.gov (англ.). Процитовано 9 квітня 2023. 
5. Synthego | Full Stack Genome Engineering. www.synthego.com (англ.). Процитовано 9 квітня 2023. 
6. Gaj, Thomas; Gersbach, Charles A.; Barbas, Carlos F. (1 липня 2013). ZFN, TALEN, and CRISPR/Cas-based methods for genome engineering. Trends in Biotechnology (English) 31 (7). с. 397–405. ISSN 0167-7799. PMC PMC3694601. PMID 23664777. doi:10.1016/j.tibtech.2013.04.004. Процитовано 9 квітня 2023. 
7. Jinek, Martin; Chylinski, Krzysztof; Fonfara, Ines; Hauer, Michael; Doudna, Jennifer A.; Charpentier, Emmanuelle (17 серпня 2012). A Programmable Dual-RNA–Guided DNA Endonuclease in Adaptive Bacterial Immunity. Science (англ.) 337 (6096). с. 816–821. ISSN 0036-8075. PMC PMC6286148. PMID 22745249. doi:10.1126/science.1225829. Процитовано 6 серпня 2023. 
8. Doudna, Jennifer A.; Charpentier, Emmanuelle (28 листопада 2014). The new frontier of genome engineering with CRISPR-Cas9. Science (англ.) 346 (6213). ISSN 0036-8075. doi:10.1126/science.1258096. Процитовано 6 серпня 2023. 
9. Wang, Joy Y.; Doudna, Jennifer A. (20 січня 2023). CRISPR technology: A decade of genome editing is only the beginning. Science (англ.) 379 (6629). ISSN 0036-8075. doi:10.1126/science.add8643. Процитовано 6 серпня 2023. 
10. Synthego | Full Stack Genome Engineering. www.synthego.com (англ.). Процитовано 13 січня 2023. 
11. Kevin M. Esvelt, Harris H. Wang. Genome-scale engineering for systems and synthetic biology : [ ][англ.] // Molecular Systems Biology. — 2013-01-01. — Vol. 9. — С. 641. — ISSN 1744-4292. — DOI:10.1038/msb.2012.66.
12. Wenfang Spring Tan, Daniel F. Carlson, Mark W. Walton, Scott C. Fahrenkrug, Perry B. Hackett. Precision editing of large animal genomes : [ ][англ.] // Advances in Genetics. — 2012-01-01. — Vol. 80. — С. 37—97. — ISSN 0065-2660. — DOI:10.1016/B978-0-12-404742-6.00002-8.
13. Doudna, Jennifer A.; Charpentier, Emmanuelle (28 листопада 2014). The new frontier of genome engineering with CRISPR-Cas9. Science (англ.) 346 (6213). с. 1258096. ISSN 0036-8075. doi:10.1126/science.1258096. Процитовано 9 квітня 2023. 
14. Adli, Mazhar (15 травня 2018). The CRISPR tool kit for genome editing and beyond. Nature Communications (англ.) 9 (1). с. 1911. ISSN 2041-1723. doi:10.1038/s41467-018-04252-2. Процитовано 9 квітня 2023. 
15. Koonin, Eugene V.; Gootenberg, Jonathan S.; Abudayyeh, Omar O. (16 травня 2023). Discovery of Diverse CRISPR-Cas Systems and Expansion of the Genome Engineering Toolbox. Biochemistry (англ.). ISSN 0006-2960. doi:10.1021/acs.biochem.3c00159. Процитовано 14 червня 2023. 
16. Joung, J. Keith; Sander, Jeffry D. (2013-01). TALENs: a widely applicable technology for targeted genome editing. Nature Reviews Molecular Cell Biology (англ.) 14 (1). с. 49–55. ISSN 1471-0080. PMC PMC3547402. PMID 23169466. doi:10.1038/nrm3486. Процитовано 9 квітня 2023. 
17. Bhardwaj, Anuradha; Nain, Vikrant (21 серпня 2021). TALENs—an indispensable tool in the era of CRISPR: a mini review. Journal of Genetic Engineering and Biotechnology 19 (1). с. 125. ISSN 2090-5920. PMC PMC8380213. PMID 34420096. doi:10.1186/s43141-021-00225-z. Процитовано 9 квітня 2023. 
18. Nemudryi, A. A.; Valetdinova, K. R.; Medvedev, S. P.; Zakian, S. M. (15 вересня 2014). TALEN and CRISPR/Cas Genome Editing Systems: Tools of Discovery. Acta Naturae 6 (3). с. 19–40. ISSN 2075-8251. doi:10.32607/20758251-2014-6-3-19-40. Процитовано 9 квітня 2023. 
19. Maeder, Morgan L.; Thibodeau-Beganny, Stacey; Osiak, Anna; Wright, David A.; Anthony, Reshma M.; Eichtinger, Magdalena; Jiang, Tao; Foley, Jonathan E. та ін. (25 липня 2008). Rapid “Open-Source” Engineering of Customized Zinc-Finger Nucleases for Highly Efficient Gene Modification. Molecular Cell (English) 31 (2). с. 294–301. ISSN 1097-2765. PMC PMC2535758. PMID 18657511. doi:10.1016/j.molcel.2008.06.016. Процитовано 9 квітня 2023.  рекомендується |displayauthors= (довідка)
20. Paschon, David E.; Lussier, Stephanie; Wangzor, Tenzin; Xia, Danny F.; Li, Patrick W.; Hinkley, Sarah J.; Scarlott, Nicholas A.; Lam, Stephen C. та ін. (8 березня 2019). Diversifying the structure of zinc finger nucleases for high-precision genome editing. Nature Communications (англ.) 10 (1). с. 1133. ISSN 2041-1723. doi:10.1038/s41467-019-08867-x. Процитовано 9 квітня 2023.  рекомендується |displayauthors= (довідка)
21. Rees, Holly A.; Liu, David R. (2018-12). Base editing: precision chemistry on the genome and transcriptome of living cells. Nature Reviews Genetics (англ.) 19 (12). с. 770–788. ISSN 1471-0064. PMC PMC6535181. PMID 30323312. doi:10.1038/s41576-018-0059-1. Процитовано 9 квітня 2023. 
22. Kantor, Ariel; McClements, Michelle E.; MacLaren, Robert E. (2020-01). CRISPR-Cas9 DNA Base-Editing and Prime-Editing. International Journal of Molecular Sciences (англ.) 21 (17). с. 6240. ISSN 1422-0067. PMC PMC7503568. PMID 32872311. doi:10.3390/ijms21176240. Процитовано 9 квітня 2023. 
23. Zhao, Zhihan; Shang, Peng; Mohanraju, Prarthana; Geijsen, Niels (2023-03). Prime editing: advances and therapeutic applications. Trends in Biotechnology. ISSN 0167-7799. doi:10.1016/j.tibtech.2023.03.004. Процитовано 10 червня 2023. 
24. Chen, Peter J.; Liu, David R. (2023-03). Prime editing for precise and highly versatile genome manipulation. Nature Reviews Genetics (англ.) 24 (3). с. 161–177. ISSN 1471-0064. doi:10.1038/s41576-022-00541-1. Процитовано 9 квітня 2023. 
25. Huang, Zhangrao; Liu, Gang (2023). Current advancement in the application of prime editing. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology 11. ISSN 2296-4185. PMC PMC9978821. PMID 36873365. doi:10.3389/fbioe.2023.1039315. Процитовано 9 квітня 2023. 
26. Huang, Tony P.; Newby, Gregory A.; Liu, David R. (2021-02). Precision genome editing using cytosine and adenine base editors in mammalian cells. Nature Protocols (англ.) 16 (2). с. 1089–1128. ISSN 1750-2799. doi:10.1038/s41596-020-00450-9. Процитовано 9 квітня 2023. 
27. Phan, Hong Thi Lam; Lee, Hyunji; Kim, Kyoungmi (2023-05). Trends and prospects in mitochondrial genome editing. Experimental & Molecular Medicine (англ.) 55 (5). с. 871–878. ISSN 2092-6413. doi:10.1038/s12276-023-00973-7. Процитовано 10 червня 2023. 
28. Prakash, Versha; Moore, Marc; Yáñez-Muñoz, Rafael J. (1 березня 2016). Current Progress in Therapeutic Gene Editing for Monogenic Diseases. Molecular Therapy (English) 24 (3). с. 465–474. ISSN 1525-0016. PMC PMC4786935. PMID 26765770. doi:10.1038/mt.2016.5. Процитовано 9 квітня 2023. 
29. Mittal, Rama Devi (1 січня 2019). Gene Editing in Clinical Practice: Where are We?. Indian Journal of Clinical Biochemistry (англ.) 34 (1). с. 19–25. ISSN 0974-0422. PMC PMC6346614. PMID 30728669. doi:10.1007/s12291-018-0804-4. Процитовано 9 квітня 2023. 
30. Wenyi Liu, Luoxi Li, Jianxin Jiang,Min Wu, and Ping Lin. Applications and challenges of CRISPR-Cas gene-editing to disease treatment in clinics. academic.oup.com. PMC PMC8444435. PMID 34541453. doi:10.1093/pcmedi/pbab014. Процитовано 9 квітня 2023. 
31. Chavez, Michael; Chen, Xinyi; Finn, Paul B.; Qi, Lei S. (2023-01). Advances in CRISPR therapeutics. Nature Reviews Nephrology (англ.) 19 (1). с. 9–22. ISSN 1759-507X. doi:10.1038/s41581-022-00636-2. Процитовано 9 квітня 2023. 
32. У США «відредагували» геном пацієнта з рідкісним захворюванням. Укрінформ. 18 листопада 2017. Процитовано 18 листопада 2017. 
33. Reuters (26 листопада 2018). China Orders Investigation After Scientist Claims First Gene-Edited Babies. The New York Times. Процитовано 26 листопада 2018. 
34. У Китаї заявили про народження перших генетично відредагованих дітей. Прорив чи небезпека?. Радіо Свобода. 29 листопада 2018. Процитовано 29 листопада 2018. 
35. Zaidi, Syed Shan-e-Ali; Mahas, Ahmed; Vanderschuren, Hervé; Mahfouz, Magdy M. (30 листопада 2020). Engineering crops of the future: CRISPR approaches to develop climate-resilient and disease-resistant plants. Genome Biology 21 (1). с. 289. ISSN 1474-760X. PMC PMC7702697. PMID 33256828. doi:10.1186/s13059-020-02204-y. Процитовано 9 квітня 2023. 
36. Abdul Aziz, Mughair; Brini, Faical; Rouached, Hatem; Masmoudi, Khaled (2022). Genetically engineered crops for sustainably enhanced food production systems. Frontiers in Plant Science 13. ISSN 1664-462X. PMC PMC9680014. PMID 36426158. doi:10.3389/fpls.2022.1027828. Процитовано 9 квітня 2023. 
37. Hamdan, Mohd Fadhli; Mohd Noor, Siti Nurfadhlina; Abd-Aziz, Nazrin; Pua, Teen-Lee; Tan, Boon Chin (2022-01). Green Revolution to Gene Revolution: Technological Advances in Agriculture to Feed the World. Plants (англ.) 11 (10). с. 1297. ISSN 2223-7747. PMC PMC9146367. PMID 35631721. doi:10.3390/plants11101297. Процитовано 9 квітня 2023. 
38. Wan, Lili; Wang, Zhuanrong; Tang, Mi; Hong, Dengfeng; Sun, Yuhong; Ren, Jian; Zhang, Na; Zeng, Hongxia (2021-07). CRISPR-Cas9 Gene Editing for Fruit and Vegetable Crops: Strategies and Prospects. Horticulturae (англ.) 7 (7). с. 193. ISSN 2311-7524. doi:10.3390/horticulturae7070193. Процитовано 9 квітня 2023. 
39. Kumar, Gulshan; Shekh, Ajam; Jakhu, Sunaina; Sharma, Yogesh; Kapoor, Ritu; Sharma, Tilak Raj (2020). Bioengineering of Microalgae: Recent Advances, Perspectives, and Regulatory Challenges for Industrial Application. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology 8. ISSN 2296-4185. PMC PMC7494788. PMID 33014997. doi:10.3389/fbioe.2020.00914. Процитовано 9 квітня 2023. 
40. Grama, Samir B.; Liu, Zhiyuan; Li, Jian (2022-05). Emerging Trends in Genetic Engineering of Microalgae for Commercial Applications. Marine Drugs (англ.) 20 (5). с. 285. ISSN 1660-3397. PMC PMC9143385. PMID 35621936. doi:10.3390/md20050285. Процитовано 9 квітня 2023. 
41. Tavakoli, Kamand; Pour-Aboughadareh, Alireza; Kianersi, Farzad; Poczai, Peter; Etminan, Alireza; Shooshtari, Lia (2021-09). Applications of CRISPR-Cas9 as an Advanced Genome Editing System in Life Sciences. BioTech (англ.) 10 (3). с. 14. ISSN 2673-6284. PMC PMC9245484. PMID 35822768. doi:10.3390/biotech10030014. Процитовано 9 квітня 2023. 
42. Li, Hongyi; Yang, Yang; Hong, Weiqi; Huang, Mengyuan; Wu, Min; Zhao, Xia (3 січня 2020). Applications of genome editing technology in the targeted therapy of human diseases: mechanisms, advances and prospects. Signal Transduction and Targeted Therapy (англ.) 5 (1). с. 1–23. ISSN 2059-3635. PMC PMC6946647. PMID 32296011. doi:10.1038/s41392-019-0089-y. Процитовано 7 березня 2023. 
43. Gori, Jennifer L.; Hsu, Patrick D.; Maeder, Morgan L.; Shen, Shen; Welstead, G. Grant; Bumcrot, David (2015-07). Delivery and Specificity of CRISPR/Cas9 Genome Editing Technologies for Human Gene Therapy. Human Gene Therapy (англ.) 26 (7). с. 443–451. ISSN 1043-0342. doi:10.1089/hum.2015.074. Процитовано 7 березня 2023. 
44. Maeder, Morgan L.; Gersbach, Charles A. (1 березня 2016). Genome-editing Technologies for Gene and Cell Therapy. Molecular Therapy (English) 24 (3). с. 430–446. ISSN 1525-0016. PMC PMC4786923. PMID 26755333. doi:10.1038/mt.2016.10. Процитовано 7 березня 2023.